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外周血淋巴細胞分離管

本品采用密度梯度離心法，根據細胞密度差異，借助分離液和離心，進行細胞分離純化。細胞分離液產生一定程度的密度梯度，經離心后，紅細胞、粒細胞沉于管底；PBMC（單個 核細胞，包括淋巴細胞和單核細胞等）漂浮于分離液的液面上，目的細胞保留在設計的嵌套之上，分離管中獨特的嵌套，能夠最大程度的減少目的樣品和密度階梯介質的混合，最后只需從離心管中簡單傾倒，而無需其他技術性的專業操作。

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使用方法/ Instructions

前期準備

1) 將分(fen)離液的溫度平衡至室溫（RT），避光。

2) 將分(fen)(fen)離(li)(li)(li)液(ye)(ye)用移液(ye)(ye)管(guan)從(cong)分(fen)(fen)離(li)(li)(li)管(guan)嵌(qian)套的(de)中心孔中加入：15ml的(de)分(fen)(fen)離(li)(li)(li)管(guan)需要(yao)加入約(yue)4ml分(fen)(fen)離(li)(li)(li)液(ye)(ye)；50ml的(de)分(fen)(fen)離(li)(li)(li)管(guan)需要(yao)加入約(yue)13ml分(fen)(fen)離(li)(li)(li)液(ye)(ye)，確保(bao)分(fen)(fen)離(li)(li)(li)液(ye)(ye)覆蓋嵌(qian)套上方。

3) 平衡至(zhi)室溫后的(de)分離管(guan)就可以加(jia)入抽取(qu)的(de)抗凝血(xue)和(he)骨髓了。雖(sui)然(ran)加(jia)入稀釋標本(ben)的(de)生理鹽水不是十分必(bi)要，但是它能幫助提高(gao)分離效果。

分離過程

加入細胞分離液                                   加入樣本                             離心后分層          收集富集細胞、重復洗滌


1) 將抗凝樣本（血或骨髓，如果需要可以用生理鹽水稀釋）延管壁緩慢倒入或用移液管延管壁緩慢加入到分離管中：如果用15ml的分離管建議使用4-9ml樣本；如果用50ml的分離管建議使用13-30ml樣本。
2) 室溫下離心，離心力為1200 x g需要10分鐘，關閉離心機。對于放置24h以上的樣品，建議離心時間加長。
3) 離心后液體分離情況（從上到下）為：a血漿 ；b富集的細胞部分（中間相包含淋巴細胞/PBMCs細胞）；c分離液；d嵌套；e沉淀（紅細胞和粒細胞）。采集或丟棄富集細胞所在層以上5到10mm的血漿層有助于防止富集細胞被血小板再次污染。
4) 收獲富集細胞（淋巴細胞/PBMCs細胞），將分離管中上清倒入另一干凈離心管中，分離管中的嵌套能有效避免富集細胞被紅細胞和粒細胞再次污染。建議不要將分離管倒置2s以上。
5) 用磷酸鹽緩沖液（PBS）洗滌富集細胞（淋巴細胞/PBMCs細胞），然后在250 x g離心力下離心10分鐘。
6) 按步驟5重復洗滌2次，最后用5ml PBS緩沖液重新懸浮細胞。


注意事項/ Cautions
1) 本產品應由經過專業培訓的人員操作，并遵守良好的實驗室規范。
2) 請勿重復使用分離管。
3) 由于各品牌離心機的性能不同，地區溫度環境差異，可能影響分離效果，用戶可以調節離心轉速和離心的時間，摸索最佳的分離條件（具體分離條件由各實驗室自定）。
4) 可用于人類外周血、骨髓和臍帶血樣本。它不適用于白細胞分離樣本、血沉棕黃層樣本或超過48小時的樣本。
5) 離心后，細胞可能聚集在富集層以上的分離管的管壁上。這種聚合是正常的，受樣本質量、樣本放置時間和抗凝劑類型的影響。此聚合與分離管的使用無關。細胞可以通過使用移液管尖端刮管壁的一側來清除。
6) 處理任何生物來源的標本，使用采血針、采血管系列、相關儀器等一定要注意按嚴格的操作規程使用。請把標本當成可能感染 HIV、HBV、HCV等傳染病的危險物質處理。為避免操作時感染的危險，請使用一次性手套。